Estandarización de un procedimiento espectrofotométrico para la cuantificación de polisacárido capsular de Neisseria meningitidis serogrupo X / Standardization of a spectrophotometric procedure for the quantification of Neisseria meningitidis serogroup X capsular polysaccharide

En el presente trabajo se realiza la estandarización del procedimiento espectrofotométrico de determinación de polisacárido capsular e intermedios de Neisseria meningitidis serogrupo X, mediante la determinación de los grupos fosfodiéster presentes en su estructura, por el método de Chen. Se realizó un análisis de los siguientes criterios para la estandarización: linealidad, precisión (repetibilidad y precisión intermedia) y exactitud. Se demostró mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que el método es lineal (r > 0,99), el coeficiente de variación del factor respuesta < 5 por ciento, la desviación estándar relativa de la pendiente < 2 por ciento, no existiendo diferencia estadísticamente significativa entre el intercepto de la ecuación con respecto a cero; exacto, porque no existe diferencia estadísticamente significativa entre la concentración determinada en un material de trabajo y su concentración nominal; también demostró ser repetible, pues el coeficiente de variación de las concentraciones de la muestra evaluada (2,44; 2,43; 0,88 por ciento para las concentraciones bajas, medias y altas, respectivamente) es inferior al 3 por ciento y no existen diferencias estadísticamente significativas entre las medias de los resultados obtenidos por dos analistas, evaluados durante cuatro días a tres niveles de concentración. La precisión intermedia es satisfactoria(AU)

The present work comprises the standardization a spectrophotometric procedure for assessing Neisseria meningitidis, serogroup X capsular polysaccharide and their intermediates of modification, the phosphodiesters groups present in its structure, based on Chen method. An analysis of the following standardization criteria was performed: linearity, precision (repeatability and intermediate precision) and accuracy. It was demonstrated through the experimental design and the statistical procedures used that the method is linear (r > 0.99), the coefficient of variation of the response factor < 5 percent, the relative standard deviation of the slope < 2 percent, with no statistically significant difference between the intercept of the equation with respect to zero; exact, because there is no statistically significant difference between the concentration determined in a work material and its nominal concentration; it also proved to be repeatable, because the coefficient of variation of the concentrations of the sample (2.44; 2.43; 0.88 percent for low, medium and high concentrations respectively) is less than 3 percent and there is no statistically significant difference between the means of the results obtained by two analysts, evaluated for four days at three concentration levels. Its intermediate precision was satisfactory(AU)

Activación del polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae serotipo 23F para la obtención de vacunas conjugadas / Activation of the capsular polysaccharide serotype 23F of Streptococcus pneumoniae to obtain conjugate vaccine

En la actualidad, las vacunas conjugadas constituyen un gran hito en el desarrollo de fármacos que protegen contra las enfermedades infecciosas. Estas vacunas no solo disminuyen drásticamente la mortalidad y morbilidad de diferentes enfermedades causadas por bacterias en la población infantil; sino que también repercuten sobre la población no vacunada. Las vacunas conjugadas se basan en establecer una unión covalente entre un polisacárido y una proteína portadora para lo cual existen diferentes procedimientos químicos. Todos los procedimientos de conjugación requieren la presencia de grupos reactivos complementarios que muchas veces son generados en ambas macromoléculas. Este trabajo se enfoca en el estudio de la reacción de fragmentación y de la oxidación peryódica sobre el polisacárido capsular serotipo 23F de Streptococcus pneumoniae para su uso como antígeno vacunal. Se estableció la fragmentación del polisacárido mediante hidrólisis con ácido acético y trifluoroácetico. En el caso de la reacción de oxidación se encontró que la cantidad de moles de peryodato de sodio y la temperatura influyen de manera directamente proporcional sobre la generación de grupos carbonilos. Adicionalmente se demostró que el sustituyente glicerol-fosfatos presente en la estructura del serotipo 23F es relevante para conservar la antigenicidad. El procedimiento descrito permite obtener conjugados inmunogénicos a partir del polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae serotipo 23F en el modelo de conejo(AU)

Nowadays conjugate vaccines are a major milestone in the development of drugs against infectious diseases. These vaccines drastically reduce mortality and morbidity from different diseases caused by bacteria in children; but also impact on non-vaccinated population. Conjugate vaccines are based on a covalent bond between a polysaccharide and a carrier protein for which there are different chemical procedures. All conjugate procedures require the presence of additional reactive groups that often are generated in both macromolecules. This work focus on the study of the fragmentation reaction and peryodic oxidation on the capsular polysaccharide serotype 23F Streptococcus pneumoniae for use as a vaccine antigen. It was possible to establish the fragmentation reaction of the polysaccharide by hydrolysis with acetic and trifluoroacetic acid. Directly proportional ratio was found between numbers of moles of sodium periodate and temperature on the oxidation reactions. In addition the glycerol-phosphate substituent was found as important motif to preserve the antigenicity. The procedure allows immunogenic conjugate from capsular polysaccharide serotype 23F of Streptococcus pneumoniae in rabbit models(AU)

Activación del polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae serotipo 23F para la obtención de vacunas conjugadas / Activation of the capsular polysaccharide serotype 23F of Streptococcus pneumoniae to obtain conjugate vaccine

En la actualidad, las vacunas conjugadas constituyen un gran hito en el desarrollo de fármacos que protegen contra las enfermedades infecciosas. Estas vacunas no solo disminuyen drásticamente la mortalidad y morbilidad de diferentes enfermedades causadas por bacterias en la población infantil; sino que también repercuten sobre la población no vacunada. Las vacunas conjugadas se basan en establecer una unión covalente entre un polisacárido y una proteína portadora para lo cual existen diferentes procedimientos químicos. Todos los procedimientos de conjugación requieren la presencia de grupos reactivos complementarios que muchas veces son generados en ambas macromoléculas. Este trabajo se enfoca en el estudio de la reacción de fragmentación y de la oxidación peryódica sobre el polisacárido capsular serotipo 23F de Streptococcus pneumoniae para su uso como antígeno vacunal. Se estableció la fragmentación del polisacárido mediante hidrólisis con ácido acético y trifluoroácetico. En el caso de la reacción de oxidación se encontró que la cantidad de moles de peryodato de sodio y la temperatura influyen de manera directamente proporcional sobre la generación de grupos carbonilos. Adicionalmente se demostró que el sustituyente glicerol-fosfatos presente en la estructura del serotipo 23F es relevante para conservar la antigenicidad. El procedimiento descrito permite obtener conjugados inmunogénicos a partir del polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae serotipo 23F en el modelo de conejos(AU)

Nowadays conjugate vaccines are a major milestone in the development of drugs against infectious diseases. These vaccines drastically reduce mortality and morbidity from different diseases caused by bacteria in children; but also impact on non-vaccinated population. Conjugate vaccines are based on a covalent bond between a polysaccharide and a carrier protein for which there are different chemical procedures. All conjugate procedures require the presence of additional reactive groups that often are generated in both macromolecules. This work focus on the study of the fragmentation reaction and peryodic oxidation on the capsular polysaccharide serotype 23F Streptococcus pneumoniae for use as a vaccine antigen. It was possible to establish the fragmentation reaction of the polysaccharide by hydrolysis with acetic and trifluoroacetic acid. Directly proportional ratio was found between numbers of moles of sodium periodate and temperature on the oxidation reactions. In addition the glycerol-phosphate substituent was found as important motif to preserve the antigenicity. The procedure allows immunogenic conjugate from capsular polysaccharide serotype 23F of Streptococcus pneumoniae in rabbit models(AU)

Quantitative proton magnetic resonance determination of N,N-dimethylformamide in one intermediate of the Quimi-Hib vaccine.

Quimi-Hib is a conjugate vaccine against Haemophilus influenza type b (Hib) where the Hib antigen is the only one produced by chemical synthesis. NMR has become the alternative of choice for the identity of intermediates during the chemical synthesis of Hib antigen. We explore a rapid quantitative proton magnetic resonance (qHNMR) assay for the determination of N,N-dimethylformamide (DMF) as a residual in one of the critical intermediates. The proposed assay has been shown to be accurate, precise for intermediate precision conditions (relative standard deviation <3% for spectrometer-to-spectrometer variations), specific (no detected interferences), and rugged (percentage difference <3% for day-to-day and spectrometer-to-spectrometer variations). The quantitative NMR assay can replace the common chromatographic methods for monitoring the DMF contents in one crucial step of the synthetic scheme.